按试剂、仪器说明书完成加样和PCR反应管准备。
　　　　（四）PCR扩增检测
　　　　PCR扩增检测在扩增区进行。待检PCR管转移至扩增区，按顺序置于PCR仪上，编辑样本信息，按试剂和仪器说明书设定循环参数。
　　　　（五）结果分析
　　　　根据所用试剂盒说明书设置基线值（baseline）。荧光阈值（threshold）设定以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点为原则，且Ct值应大于所设置的扩增循环数（或显示为undet）。使用仪器配套软件自动分析结果。
　　　　（六）质量控制
　　　　检测过程对可能出现的假阳性和假阴性进行质量控制，除了检测商品试剂盒所提供阳性和阴性对照外，每次临床样本检测时，至少应当有1份弱阳性和3份阴性质控样本（多份阴性质控样本设置对实验室“污染”所致假阳性的监控更为有效），随机放在所检测标本的中间。弱阳性质控样本可为检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒颗粒等，如所采用的商品化试剂盒有“内标”控制假阴性，或弱阳性质控样本来源困难，可暂不设弱阳性质控。阴性质控样本采用标本采集管内溶液即可。质控样本应与临床标本同等对待，参与样本核酸提取和扩增检测全过程。
　　　　试剂盒中的阳性和阴性对照用于判断实验室的有效性，按试剂盒说明书进行。
　　　　（七）实验结果的判定与解释。
　　　　按照试剂盒说明书进行。对于出现弱阳性结果的样本应进行重复检测，并注意与可能的实验室轻度或样本交叉“污染”所致假阳性结果区别。
　　　　五、检测结果报告
　　　　按照试剂盒说明书进行。
　　　　六、其它注意事项
　　　　（一）人感染H7N9禽流感病毒实验室活动、样本采集和运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。从事人感染禽流感检测的技术人员必须经过生物安全培训并具备相应的实验技能，在检测过程中必须采取生物安全防护措施（使用眼罩、N95型口罩等）。样本核酸提取必须在Ⅱ级生物安全实验室，经过年检合格的二级生物安全柜内进行。实验室应具有良好的通风。
　　　　（二）注意仪器设备的日常和定期维护，加样器、扩增仪和温育设备应进行定期校准。试剂盒及一次性使用的无DNA酶和RNA酶PCR反应管、离心管、带滤芯吸头等应进行每批质检。
　　　　（三）实验应严格分区操作；各区物品、工作服等均应当专区专用，不得交叉使用。实验后应及时清洁工作台，以防污染。
　　　　（四）每批实验室后，可采取实验室通风、10%次氯酸钠溶液擦洗地台面、紫外照射等措施，消除可能存在的扩增产物气溶胶污染。
　　　　（五）使用中国疾控中心制备试剂开展检测工作时，可参考相应试剂盒说明书（见附件1、2）有关要求。
　　　　
附件：1.H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书
2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书
　　　　
　　　　
　　　　
　　　　
H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书

　　　　【产品名称】
　　　　通用名称：H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）
　　　　英文名称：Diagnostic Kit for H7N9 subtype avian flu virus RNA（Fluorescence PCR）
　　　　【包装规格】48人份/盒。
　　　　【预期用途】
　　　　本试剂用于对咽拭子样本中H7N9亚型禽流感病毒RNA进行定性检测，用于H7N9禽流感病毒感染的辅助诊断及流行病学监控。
　　　　【检验原理】根据荧光PCR技术原理，针对H7N9亚型禽流感病毒的HA基因和NA基因设计特异性引物和Taqman探针，通过荧光PCR检测仪进行检测，从而实现对H7N9亚型禽流感病毒RNA的定性检测。试剂盒以正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P（RNase P）的mRNA为正常人体细胞对照，对提取和检测过程进行监控。
　　　　【主要组成成分】
　　　　
　　　
名称 成分 　　规格 数量(管)
H7反应液 　　含内标RNP 、H7亚型特异基因的引物探针混合液 1.0ml/管 1
N9反应液 　　含内标RNP 、N9亚型特异基因的引物探针混合液 1.0ml/管 1
DNA聚合酶 　　DNA聚合酶，不可用其他同类DNA聚合酶替代 60μl /管 1
逆转录酶 　　逆转录酶，不可用其他同类逆转录酶替代 60μl /管 1
阳性对照 　　RNP、H7、N9 RNA假病毒混合物 1.0ml/管 1
阴性对照 　　DEPC水 1.0ml/管 1
　　本品各组成成分均不得与其他产品或不同批号产品中的相应组成成分进行互换。
　　
　　　　本品不包含，但对试验必须的设备和试剂：

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